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专利名称:一种肿瘤细胞耐受促凋亡蛋白质分子数目绝对定量的测量方法

文章来源: 发布时间: 2021-01-21

专利名称:一种肿瘤细胞耐受促凋亡蛋白质分子数目绝对定量的测量方法

申 请 号 

CN201710556774.6

申 请 日 

2017-07-10

公开(公告)号

CN107367455B

公开(公告)日 

2020-10-16

申请(专利权)人 

中国科学院合肥物质科学研究院

发 明 人 

戴海明 王宏志 江海河 王姝洁

专利类型 

发明专利

摘 要 

 本发明提供了一种肿瘤细胞耐受促凋亡蛋白质分子数目绝对定量的测量方法。本方法通过 EGFP 标记促凋亡蛋白质,并通过流式细胞术测量肿瘤细胞所能耐受促凋亡蛋白质分子时的 EGFP 数值,通过 FITC 标记的荧光微球以及 FITC 与 EGFP 的激发荧光强度的换算,实现肿瘤细胞耐受促凋亡蛋白质分子数目的绝对定量的测量。本发明方法不仅解决了传统研究中蛋白质含量增加多少倍引起细胞凋亡而缺少绝对数值的问题,也避免了利用 BH3 分析方法中遇到的 BH3 小肽的活性问题以及 BH3 小肽与 BH3 蛋白质之间的区别问题,实现了肿瘤活细胞耐受促凋亡蛋白质分子的绝对定量测试。

主权项 

一种肿瘤细胞耐受促凋亡蛋白质分子数目绝对定量的测量方法,其特征在于,具体操作方法如下:(1)通过分子克隆的方法将所需测量的目标促凋亡分子的 cDNA 与 EGFP 分子的 cDNA 连接克隆在高表达载体内,根据需求将其放在 EGFP 的 N 端或者 C 端;(2)通过电转、病毒转染方法将质粒转染到被测试的肿瘤细胞中;(3)24 小时或者 48 小时后,收集细胞,用 APC 标记的 Annexin V 染色,并通过流式细胞仪采集肿瘤细胞中 EGFP 或 APC 或 EGFP 和 APC 的荧光强度信息,从而采集肿瘤细胞耐受促凋亡分子的临界点的 EGFP 的荧光强度信息;(4)在采集样品的同时,需利用流式细胞仪在同样的工作条件下同时采集含有一定数量的梯度 FITC 的标准荧光微球的荧光强度信息,做出 FITC 荧光强度与数量的直线关系图;(5)体外纯化 EGFP 蛋白质,通过荧光分光光度计和流式细胞仪测定并计算标准 FITC 荧光微球的数量与发射光强度的线性关系;通过荧光分光光度计和流式细胞仪测定并计算纯化的 EGFP 蛋白质分子数量与发射光强度的线性关系,由此,可计算出发射光强度相同时,标准 FITC 荧光微球与 EGFP 蛋白质数量之间的换算关系;(6)将肿瘤细胞耐受促凋亡分子的临界点的 EGFP 的荧光强度信息换算成EGFP 的分子数目,从而得到耐受促凋亡分子的绝对数值。

IPC信息 

IPC主分类号 

G01N15/14

IPC分类号 

G01N15/14

  G 物理

   G01 测量;测试

    G01N 借助于测定材料的化学或物理性质来测试或分析材料

     G01N15 测试颗粒的特性;测试多孔材料的渗透性,孔隙体积或者孔隙表面积

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